Лаборатория диагностики ВИЧ и сопутствующих инфекций

 
Заведующая лабораторией:
Елена Леонидовна ГАСИЧ
доктор биологических наук, доцент
Тел.: +375-172 68 04 16
E-mail: Этот адрес электронной почты защищен от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.
 
 

История создания

Лаборатория диагностики ВИЧ и сопутствующих инфекций как самостоятельная структура в НИИ эпидемиологии и микробиологии была организована 01.09.1998 и сохранила название до настоящего времени.

Создание лаборатории было обусловлено тем, что проблема ВИЧ-инфекции, а также парентеральных гепатитов В и С становились все более и более актуальными и требовали внедрения новых более технологичных и эффективных методов контроля за возбудителями, разработки новых диагностических тестов.

В соответствии с приказом Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 14.05.2012 № 546 "О возложении функций Республиканской референс-лаборатории генодиагностики ВИЧ-инфекции, парентеральных гепатитов В и С по определению генотипов/субтипов и резистентности к противовирусным препаратам ВИЧ, гепатитов В и С" на базе лаборатории функционирует «Республиканская референс-лаборатория генодиагностики ВИЧ-инфекции, парентеральных гепатитов В и С по определению генотипов/подтипов и резистентности к противовирусным препаратам ВИЧ, гепатитов В и С».

Состав лаборатории в 2014 г.: заведующий, главный научный сотрудник, ведущий научный сотрудник, научный сотрудник, 3 младших научных сотрудника и 2 лаборанта.

В настоящее время в лаборатории работают 2 доктора медицинских наук, 2 кандидата биологических наук.

 

 Сотрудники лаборатории диагностики ВИЧ и сопутствующих инфекций, 2014 г.

 

МАТЛАХ О.Л.

младший научный сотрудник

НЕМИРА А.С.

младший научный сотрудник

СИЛАНТЬЕВА О.В.

лаборатнт 

 

 


 Современные направления деятельности

В настоящее время лаборатория оснащена современным оборудованием, что позволяет проводить научные и прикладные исследования на самом высоком уровне по следующим направлениям: 

  • молекулярно-эпидемиологический мониторинг (определение генотипов/подтипов) циркуляции ВИЧ-1, вирусов гепатитов В, С и вируса папилломы человека (ВПЧ) высокого онкогенного риска в разных группах населения;
  • определение мутаций резистентности к препаратам антивирусной терапии ВИЧ-1, гепатитов В, С;
  • поиск новых антивирусных соединений-ингибиторов ВИЧ-1;
  • проведение экспертных исследований по расшифровке случаев умышленного инфицирования или заражения через кровь и ее продукты (ВИЧ, вирусами гепатитов В и С), расшифровка очаговых случаев инфицирования вирусами гепатитов В и С;
  • экспертное исследование новых дезинфектантов для последующего их использования в отношении инактивации ВИЧ, гепатитов В и С;
  • лабораторная диагностика ВИЧ, гепатитов В и С, вирусов герпетической группы и других возбудителей с использованием современных молекулярно-биологических методов;
  • помощь лабораториям центра и другим учреждениям республики в определении генотипов/подтипов, мутаций резистентности вирусных и бактериальных патогенов, возбудителей болезней человека и животных.

 

Основные научно-практические достижения

1. Впервые среди стран СНГ определены виды, генотипы и подтипы вируса папилломы человека (ВПЧ) высокого онкогенного риска, разработана система молекулярно-эпидемиологического мониторинга за ВПЧ высокого онкогенного риска. Отработаны условия проведения ПЦР, секвенирующей ПЦР и секвенирование с парами праймеров к L1, Е6/Е7 участкам ВПЧ-16, 18, 45. Проведенное секвенирование и последующий филогенетический анализ по данным участкам более 150 образцов позволили установить, что на территории Республики Беларусь циркулируют в основном варианты ВПЧ-16, 18, 45, занесенные недавно из стран юго-восточной Азии. Вместе с тем, было показано, что на территории страны циркулируют «старые» местные варианты ВПЧ высокого онкогенного риска, а также вирусы с Африканского континента, и это необходимо учитывать при выборе вакцин и оценке эффективности поствакцинального иммунитета. Впервые описан новый вариант ВПЧ-16 типа. Подготовлена инструкция «Молекулярно-генетический мониторинг за вирусом папилломы человека высокого онкогенного риска», утв. М-вом здравоохр. Респ. Беларусь 11.07.2014, № 250-1213.

2. ВИЧ-инфекция: впервые мире описана новая уникальная рекомбинантная форма ВИЧ-1, на которую в 2013 г. получен патент Республики Беларусь № 18124, разработаны и успешно используются в лаборатории тест-системы для генотипирования ВИЧ-1 по участкам генов gag-env и pol ВИЧ-1 (рег. удостоверения № ИМ-7.95957 и ИМ-7.103886), позволяющие проводить диагностику и определять подтипы вируса, циркулирующие на территории Беларуси, расшифровывать случаи умышленного инфицирования, вспышки ВИЧ-инфекции и случаи инфицирования через кровь и ее продукты. Разработана и применяется система молекулярно-эпидемиологического мониторинга циркуляции подтипов ВИЧ-1 на территории страны. Показано, что на территории Республики Беларусь продолжает доминировать подтип А1 ВИЧ-1, на который приходится более 90% всех новых случаев инфицирования. В тоже время, в стране увеличивается количество выявленных рекомбинантных форм, на которые уже приходится более 8% новых случаев инфицирования, при этом, если ранее рекомбинантные формы на территорию страны «завозились» из-за пределов, то в последнее время наблюдается формирование новых рекомбинантных форм на территории страны. Впервые в Гомельской области у двоих пациентов выявлен подтип G ВИЧ-1 и показано, что оба пациента получили вирус из одного источника, а в Минской области у двоих пациентов выявлен новый вариант рекомбинантной формы CRF02_AG. Разработана технология получения контрольной панели антигена/сывороток крови, содержащей и не содержащей антитела к ВИЧ-1 и антиген вируса (рег. удостоверение № ИМ-7.95269/0912). Разработана контрольная панель сывороток и антигена ВИЧ-1. Подготовлена инструкция «метод определения подтипа ВИЧ-1» (№251-1213, от 11.07.2014г. и «Метод определения подтипа ВИЧ-1 по участку гена pol» (№242-1215, от 06.03.2017г.). Разработана тест-система «Миниблот ВИЧ-1А/В» - №ИМ-7.101627.

В 300 (54,80%) из 547 изолированных и амплифицированных образцах РНК ВИЧ были выявлены мутации резистентности высокого уровня. Всего на резистентность было проверено около 1100 образцов сыворотки/плазмы крови. Определение мутаций резистентности осуществляли как с использованием коммерческой тест-системы, так и с применением разработанной нами тест-системы для генотипирования и определения мутаций резистентности ВИЧ-1 (ИМ-7.103886). Своевременное определение резистентных штаммов ВИЧ-1 позволяет эффективнее использовать разные схемы терапии и значительно улучшать жизненный статус пациентов. Отработаны условия проведения ПЦР в «гнездовом» варианте, позволяющие получать фрагмент генов gag-pol ВИЧ-1 размером 1600п.о. Показано, что разработанная нами тест-система ПЦР не уступает коммерческому набору по чувствительности и специфичности, но при этом, в два раза дешевле (15000 и 7500 долларов США). В Международную базу данных GenBank передано более 300 последовательностей ВИЧ-1.

Совместно с российскими коллегами получено 6 патентов Российской Федерации на новые антивирусные соединения.

3. Гепатиты В и С

Гепатит В. Разработана система молекулярно-эпидемиологического мониторинга циркуляции ВГВ. Всего было исследовано 600 образцов сывороток/плазмы крови. Проведенные исследования показали, что на территории страны доминирует D генотип вируса гепатита В, на который приходится 80,0% всех проанализированных случаев. Генотип А был выявлен в 18,6%, генотип С в 5 (0,8%) образцах. Впервые в одной пробе, полученной от пациента из Вьетнама, был обнаружен В4 подтип вируса гепатита В. Как показал филогенетический анализ полученных нуклеотидных последовательностей ДНК, все изученные изоляты генотипа А относились к подтипу А2, а генотипа С – к подтипу С2 ВГВ. При этом все образцы с генотипом А ВГВ были получены от жителей Беларуси, а генотип С определялся у граждан Вьетнама и Китая, прибывших на работу в нашу страну. Среди образцов, отнесенных к генотипу D вируса, 39,8% образцов относились к D2 подтипу, 23,3% – к D3 подтипу, 16,0% – к D1 подтипу, и 0,8% – к D4 подтипу вируса. При этом необходимо отметить, что D4 подтип вируса был занесен в Беларусь из Австралии. У 11 детей в возрасте от 6 месяцев до 12 лет в 4-х случаях определялся D3 подтип ВГВ, по 3 случая D1 и D2 подтип вируса и в одном случае нами был выявлен D4 подтип.

Гепатит С. Разработана система молекулярно-эпидемиологического мониторинга за циркуляцией ВГС. За период 2004 г. по январь 2016 г. было исследовано 887 образцов сывороток/плазмы крови на определение генотипа вируса гепатита С, полученных от пациентов из разных регионов Республики Беларусь. Из 887 проб 242 были от пациентов с ВИЧ-инфекцией, заразившихся парентерально при совместном введении внутривенно наркотиков. 170 (19,2%) пациентов имели ко-инфекцию ВИЧ+ВГС и 26 (2,9%) ВИЧ+ВГС+ВГВ. Проведенные исследования по генотипированию ВГС в целом по Республике Беларусь показали, что более 80% всех случаев вызвано 1b (53,8%) и 3a (27,7%) подгенотипами вируса. 1a генотип был обнаружен в 63 пробах (7,1%), в 17-х образцах (1,9%) определялся 2а генотип и в 5 и 7 пробах 2k (0,5%) и 2с (0,8%) генотипы, соответственно. Четвёртый генотип был представлен 4а (0,1%) и 4d (0,4%) подгенотипами. У 13 пациентов была определена рекомбинантная форма RF1_2k/1b (1,6%) и у одного 1d/1b (0,1%). У ВИЧ-инфицированных пациентов с ко-инфекцией ВГС и/или ВГВ, практически с одинаковой частотой, определялись 3a и 1b подгенотипы вируса: 90 (37,2%) и 98 (40,5%), соответственно, генотипы ВГС.

Зарегистрирована «Панель контрольная сывороток крови, содержащих антитела к специфическим белкам ВГС и сывороток крови разных генотипов ВГС» (рег. удостоверение № ИМ-7.98746).

В лаборатории успешно осуществляется работа по внебюджетной деятельности: диагностика ИППП, парентеральных гепатитов В и С, ВИЧ, ВПЧ, вирусов герпетической группы.

 

Подготовка кадров высшей квалификации

В лаборатории подготовлены:

- 1 доктор биологических наук по специальности «03.00.06 - вирусология» - 2002 г.
- 3 кандидата медицинских наук по специальностям «03.00.07 – микробиология» - 2007 г. и «14.00.10 – инфекционные болезни» - 2009 г., "14.02.02 - эпидемиология", "03.02.02 - вирусология" - 2016 г.

- 1 кандидат биологических наук по специальности "03.02.02 - вирусология" - 2016 г.
 

В настоящее время в лаборатории готовятся 2 доктора наук и 4 кандидата наук.

За время существования лаборатории 9 студентов БГУ проходили практику и готовили дипломные работы.

Международное сотрудничество

Лаборатория тесно сотрудничает с зарубежными коллегами. Сотрудники лаборатории работали и проходили стажировки в ведущих научных учреждениях США (Национальный институт здоровья), Японии (Национальный институт здоровья), Германии (Институт Роберта Коха и Институт физиологической химии), Голландии (Медицинский центр Амстердамского университета), Испании (Институт Карлоса IV), России (Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского в Москве; Институт особо чистых биопрепаратов в Санкт-Петербурге; Институт технической химии в Перми; ФГУП НПО «Микроген» в Москве; Федеральное бюджетное учреждение науки государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» в Новосибирске).

В настоящее время лаборатория сотрудничает со шведскими коллегами, и по достигнутой договоренности с сентября 2014 г. сотрудник лаборатории будет проходить стажировку в Каролинском Университете в Стокгольме.

Сотрудники лаборатории участвовали в выполнении международных грантов МНТЦ, ИНТАС и др.


Основные публикации

Eremin, V.F. A new unique recombinant HIV type 1 isolated from a child born to an HIV-infected mother / V.F. Eremin, E.L. Gasich, S.V. Sasinovich // AIDS Res. Hum. Retroviruses. – 2011. – Vol. 27, N 12. – P. 1323-1326. –  Available online:  http://www.liebertonline.com/doi/abs/10.1089/aid.2011.0112

Вергейчик, Г.И. Молекулярная эпидемиология генитальной папилломавирусной инфекции в Республике Беларусь / Г.И. Вергейчик, В.Ф. Еремин // Журн. микробиол. – 2012. – № 2. – С. 55-60.

HBV and HCV genotypes distribution on the territory of Belarus / E.L. Gasich, V.F. Eremin, S.V. Sasinovich, M.G. Tulinova // Abstr. 17th Int. Symp. HIV and Emerg. Infect. Dis. (ISHEID), Marseille, France. May 23-25, 2012. – Retrovirology. – 2012. Vol. 9 (suppl 1). – P. 57. – Available online: http://www.retrovirology.com/content/9/S1/P57

Генотипы вируса гепатита В, циркулирующие в Республике Беларусь / Е.Л. Гасич, В.Ф. Еремин, Н.Д. Коломиец, С.В. Сосинович, Е.Г. Фисенко, В.В. Пашкович, В.Л. Зуева, Т.А. Рогачева, М.Г. Тулинова // Здравоохранение. – 2012. – № 11. – С. 48-55.

Особенности развития эпидемии ВИЧ/СПИД в Гомельской области в 1999-2006 гг. Сообщение 2 / В.Ф. Еремин, Е.Л. Гасич, О.Н. Суетнов, Т.П. Грушко, П.Н. Грушко, С.В. Сосинович, В.В. Лукашов // Здравоохранение. – 2013. – № 3. – С. 21-29.

Особенности развития эпидемии ВИЧ/СПИДа в Гомельской области в 2008-2011 гг. Сообщение 3 / В.Ф. Еремин, Е.Л. Гасич, О.Н. Суетнов, Т.П. Грушко, П.Н. Грушко, С.В. Сосинович, В.С. Ильенкова, Е.Г. Фисенко, И.А. Карпов // Здравоохранение. – 2013. – № 4. – С. 14-26.

Рекомбинантная форма ВИЧ-1/Mos: BA (BgagApolAenv) для изучения генома и эволюции вируса ВИЧ-1 или скорости его изменчивости: пат. 18124 Респ. Беларусь, МПК C 12N 7/00 / В.Ф. Еремин, Е.Л. Гасич, С.В. Сосинович; заявитель. РНПЦ эпидемиол. и микробиол. – № а20110563; заявл. 29.04.11; опубл. 30.12.12. // Афіцыйны бюл. / Нац. цэнтр інтэлект. уласнасці. – 2014. – № 2. – С. 87-88.