Инсулин относится к полипептидным гормонам, и его основное действие направлено на поддержание углеводного баланса. С развитием биотехнологии стало возможно путем модификации молекулы инсулина создавать его аналоги. В отличие от инсулина человеческого, они не образуют ассоциированные молекулы и поэтому значительно быстрее всасываются в кровь. В результате направленного изменения последовательности аминокислот были получены аналоги инсулина ультракороткого действия. Включение в молекулу остатка жирной кислоты создало возможность получить аналог инсулина продолжительного действия (инсулин детемир).

Для биологических лекарственных средств, каковыми являются препараты инсулина, одним из показателей качества является биологическая активность.  Согласно Правилам проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза, утвержденным Решением Совета Евразийской экономической комиссии от 3 ноября 2016 г. № 89, биологическая активность «определяет особую способность или свойство препарата оказывать определенный биологический эффект». Для препаратов инсулина биологическая активность является интегральным показателем, характеризующим результат взаимодействия инсулина, обладающего определенными фармацевтическими характеристиками, с системами организма, участвующими в регуляции углеводного обмена. Для определения биологической активности препаратов инсулина используют экспериментальные модели, воспроизводящие его действие на человеческий организм в целом (методы in vivo) и на отдельные изолированные системы или имитирующие различные этапы взаимодействия гормона с организмом (методы in vitro).

В лаборатории контроля качества иммунобиологических лекарственных средств проводятся испытания по определению биологической активности инсулина в соответствии с ГФ РБ, ст.2.7.50. Величину биологической активности, полученную в опытах на животных, выражают в единицах действия. За единицу действия принимают специфическую активность такого количества инсулина или его аналога, которое по гипогликемическому действию эквивалентно одной международной единице (МЕ). Для контроля качества препаратов инсулина и его аналогов, а также их субстанций по показателю «Биологическая активность» in vivo применяют метод двойного перекреста. Испытания проводят на здоровых кроликах массой 2,5-­3,5 кг.

Теоретически, если значения биологической активности стандартного образца (СО) и испытуемого препарата (равны, то в течение двух дней испытания каждое животное подкожно должно получить одно и то же суммарное количество инсулина или его аналога. Разность ответов одной и той же особи в разные дни позволяет оценить биологическую активность препарата и ее доверительные границы. Данная схема позволяет максимально сгладить естественную вариабельность реакции животных и определить правильность результатов каждого испытания с помощью дисперсионного анализа. Значение биологической активности вычисляют на основании полученной разности между средними значениями ответа СО и испытуемого препарата, а также угла наклона их общей линии дозозависимости.

На сегодняшний день определение биологической активности на животных (метод двойного перекреста) остается единственным для надлежащего контроля качества препаратов инсулина и его аналогов.