Набор реагентов для диагностики оспы обезьян разработали в РНПЦ эпидемиологии и микробиологии. Была использована стандартная технология, основанная на полимеразной цепной реакции, которая позволяет выявлять генетический материал возбудителя в клиническом образце, рассказал заведующий лабораторией биотехнологии и иммунодиагностики особо опасных инфекций, кандидат биол. наук Павел Семижон.

Павел Семижон: Это классическая ПЦР-система, основанная на подборе нуклеотидных последовательностей (ДНК), которые являются специфичными для определенного возбудителя.

В нашем наборе реагентов мы использовали последовательности, характерные для западноафриканского типа, и последовательности, которые являются общими как для западноафриканского, так и для центральноафриканского типа возбудителя оспы обезьян. Это один набор реагентов, включающий две ПЦР-смеси.

В основе стандартных ПЦР-систем лежит принцип многократного удвоения определенного участка ДНК (амплификация). В результате нарабатывается то количество ДНК, которое является достаточным для визуального обнаружения. При этом происходит накопление только того участка, который соответствует заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Павел Семижон: В нашем случае накопление специфического продукта регистрируется в режиме реального времени по нарастанию уровня флуоресценции по определенному каналу.

Впрочем, технология создания тест-систем на основе ПЦР для диагностики различных инфекционных заболеваний в РНПЦ уже хорошо отработана. Например, с ее помощью были созданы ПЦР-наборы для диагностики лихорадки Эбола и COVID-19.

Павел Семижон: Как правило, для того чтобы тест-система стала полноценной, необходимо иметь в наличии положительный контрольный образец. Для нашего набора реагентов такой фрагмент возбудителя был получен синтетическим способом.

Дело в том, что во всем мире есть только две лаборатории, в которых имеются образцы (штаммы) оспы обезьян. Они находятся в России и США. Однако существуют базы данных нуклеотидных последовательностей, в которых есть информация в том числе и по возбудителю оспы обезьян, что позволило нам с помощью методов биоинформационного моделирования проанализировать участки нуклеотидных последовательностей данного возбудителя, определить мишени и разработать схему для их индикации.

В созданном отечественными специалистами наборе реагентов в качестве клинического образца может использоваться кровь, назофарингеальный мазок, сыворотка или плазма, а также содержимое везикул. Результаты ПЦР-диагностики будут готовы максимум через 3–4 ч после получения пробы.

Оспа обезьян — опасное инфекционное заболевание, возбудитель которого относится к 4-й группе риска. Это значит, что при работе с таким возбудителем (например, при анализе клинического материала и выделении вируса, дезинфекции и обеззараживании остатков образцов) нужно соблюдать максимально безопасные условия, создать которые можно лишь в специализированных лабораториях. РНПЦ эпидемиологии и микробиологии — единственный центр в республике, которой обладает такими возможностями.